在全球新冠疫情（COVID-19）尚未完全平息之際，猴痘疫情異軍突起。八月初美國(guó)聯(lián)邦政府宣布進(jìn)入公共衛(wèi)生緊急狀態(tài)，以加強(qiáng)應(yīng)對(duì)猴痘疫情。目前，美國(guó)已累計(jì)6600多人感染猴痘，是全球病例最多的國(guó)家。

美國(guó)宣布進(jìn)入公衛(wèi)緊急狀態(tài)，意味著美國(guó)政府將為此騰出資金和其他資源來(lái)對(duì)抗猴痘病毒。美國(guó)衛(wèi)生與公眾服務(wù)部長(zhǎng)貝塞拉（Xavier Becerra）說(shuō)：“我們準(zhǔn)備將應(yīng)對(duì)這種病毒的反應(yīng)提升到一個(gè)新的水平，我們敦促每個(gè)美國(guó)人認(rèn)真對(duì)待猴痘?！卑讓m表示已經(jīng)提供了超過(guò)110萬(wàn)劑疫苗，并幫助將美國(guó)國(guó)內(nèi)的診斷能力，提高到每周可做8萬(wàn)次的測(cè)試。

美國(guó)聯(lián)邦政府暨FDA對(duì)于猴痘病毒的應(yīng)對(duì)分為檢測(cè)，預(yù)防，和治療幾個(gè)方面。本文總結(jié)了目前FDA對(duì)于猴痘檢測(cè)的態(tài)度和猴痘檢測(cè)試劑的批準(zhǔn)情況。

（1）FDA對(duì)于檢測(cè)試劑的批準(zhǔn)

猴痘病毒是正痘家族的一種，正痘家族的其他成員還包括天花病毒，牛痘病毒等。在FDA的官方數(shù)據(jù)庫(kù)里面注冊(cè)的正痘檢測(cè)試劑一共有4款510（K），還有一款de Novo， 都是美國(guó)疾控中心（CDC）注冊(cè)的，也就是說(shuō)到目前為止還沒有任何私營(yíng)企業(yè)注冊(cè)過(guò)這個(gè)產(chǎn)品。

所有這幾款產(chǎn)品都是用“非天花正痘病毒實(shí)時(shí) PCR 引物和探針組合試劑”來(lái)命名的， 實(shí)際上這幾種產(chǎn)品基本是同一種。顧名思義，產(chǎn)品是針對(duì)除了天花以外的正痘病毒家族，而不是單單猴痘病毒的。具體情況分析如下：

K053469

K053469是FDA最早批準(zhǔn)的關(guān)于正痘家族的檢測(cè)試劑。試劑的申請(qǐng)人是美國(guó)疾控中心（CDC）。它采用實(shí)時(shí)PCR引物和探針組合，主要目的不是用于猴痘感染，而是用于監(jiān)控天花疫苗接種時(shí)產(chǎn)生的不良反應(yīng)，比如牛痘感染。這個(gè)試劑不能檢測(cè)天花病毒，也不能區(qū)別猴痘和牛痘病毒。產(chǎn)品于2005年獲得批準(zhǔn)。

K181205

K181205是FDA于2018年9月20號(hào)批準(zhǔn)的，試劑的申請(qǐng)人也是美國(guó)疾控中心（CDC）。同樣采用實(shí)時(shí)PCR引物和探針組合，用于監(jiān)控天花疫苗接種時(shí)產(chǎn)生的不良反應(yīng)，比如牛痘感染。

這個(gè)試劑和K053469幾乎一樣， 唯一的區(qū)別是采用了不同的原料，和更新了使用目的。當(dāng)時(shí)的背景是擔(dān)心天花病毒可能被恐怖分子利用， 因此美國(guó)在小范圍內(nèi)恢復(fù)了天花疫苗的接種。牛痘是天花疫苗的組成成分，可能會(huì)造成接種人感染， 因此FDA批準(zhǔn)的這個(gè)試劑的主要目的也是用于探測(cè)牛痘病毒的感染。同樣的，這個(gè)試劑不能檢測(cè)天花病毒，也不能區(qū)別猴痘和牛痘。

K221658

時(shí)間轉(zhuǎn)眼到了偉大的2022年。猴痘病毒登上了舞臺(tái)。FDA于6月10日批準(zhǔn)了一款新的檢測(cè)試劑K221658.

K221658的實(shí)質(zhì)等同產(chǎn)品是上面提到的K181205. 事實(shí)上， 兩款產(chǎn)品基本一樣， 一些細(xì)小的區(qū)別表現(xiàn)在：

◆申報(bào)的目的是應(yīng)對(duì)新型猴痘病毒而不是牛痘病毒。

◆產(chǎn)品使用的試劑和儀器有所改進(jìn)

◆產(chǎn)品的性能數(shù)據(jù)在FDA網(wǎng)站上沒有公開，但是據(jù)內(nèi)部消息，性能有一定的改進(jìn)。

產(chǎn)品使用熒光探針，該探針由連接在寡核苷酸的5' 端的報(bào)告染料(FAM)和連接在 3' 端的猝滅劑 (BHQ1) 組成。探針識(shí)別位于正向和反向引物之間的特定目標(biāo)序列。在 PCR 循環(huán)的延伸階段，Taq聚合酶的 5' 核酸酶會(huì)降解探針，導(dǎo)致染料與猝滅劑分離，從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。在每個(gè)循環(huán)中，更多的染料分子從探針上裂解下來(lái)，從而在PCR 期間實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。該測(cè)定中使用的 Taq 聚合酶在室溫下是無(wú)活性的，在95°C 時(shí)會(huì)被激活，從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生。

和以前兩款產(chǎn)品一樣，產(chǎn)品的申請(qǐng)人是美國(guó)疾控中心（CDC），產(chǎn)品只可以在國(guó)家響應(yīng)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)的成員實(shí)驗(yàn)室（LRN實(shí)驗(yàn)室）使用。這是經(jīng)過(guò)專門認(rèn)證的高質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室，目前在47個(gè)州有68家實(shí)驗(yàn)室。

K221834

兩周后的6月23日， FDA再次出手，批準(zhǔn)了K221834. K221834和前面提到的K221658 是完全相同的產(chǎn)品， 只不過(guò)把授權(quán)實(shí)驗(yàn)室從國(guó)家響應(yīng)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)的成員實(shí)驗(yàn)室（The Laboratory Response Network）擴(kuò)大到疾控中心特許實(shí)驗(yàn)室（CDC designated laboratories.），目的在于擴(kuò)大總體測(cè)試能力。

目前全美國(guó)有四家CDC特許實(shí)驗(yàn)室可以運(yùn)行這個(gè)測(cè)試， 很快會(huì)有第五家實(shí)驗(yàn)室獲得CDC特許。

De Novo DE070001

De Novo是美國(guó)創(chuàng)新器械的流程。但是CDC提交的這款DE070001是一個(gè)奇怪的存在。它是在2007年由疾控中心（CDC）提交的，卻在2018年才被批準(zhǔn)，批準(zhǔn)日期是2018年9月21號(hào)，也就是上面提到的K181205的批準(zhǔn)日期的第二天。（見下圖） 目前FDA網(wǎng)站上沒有這個(gè)產(chǎn)品的任何信息，F(xiàn)DA 和CDC在討論猴痘病毒檢測(cè)的時(shí)候也從來(lái)沒有提到這款試劑。

實(shí)驗(yàn)室自研檢測(cè)試劑

除了上述FDA批準(zhǔn)的試劑以外，F(xiàn)DA在7月27日的市政廳會(huì)議上再次證實(shí)，F(xiàn)DA允許檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用自己研發(fā)的猴痘檢測(cè)試劑或檢測(cè)方法， 前提是檢測(cè)方法經(jīng)過(guò)完整的方法驗(yàn)證，并且只在本實(shí)驗(yàn)室使用。 這樣開發(fā)出來(lái)的檢測(cè)方法不需要FDA的批準(zhǔn)和備案。

FDA這樣做的目的也是為了擴(kuò)大檢測(cè)能力。FDA在新冠疫情初期也采用了同樣的做法。

猴痘樣本的采集

7月15日， FDA發(fā)布安全通報(bào)，在猴痘樣本的采集時(shí)候，要求只能采用病變組織的拭子樣本。目前的臨床證據(jù)不支持其他的樣本采集方式，比如唾液和血液。病變組織的干拭子，VTM 中的病變組織拭子或結(jié)痂是可以接受的。采樣拭子可以是經(jīng)過(guò)滅菌的塑料材質(zhì)（polyester，nylon等）

解讀

由于猴痘病以前在美國(guó)很少見，CDC 開發(fā)的試劑是目前唯一經(jīng)FDA 510(k) 批準(zhǔn)的檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法流程比較復(fù)雜， 對(duì)操作人員的專業(yè)要求較高，需要經(jīng)過(guò)培訓(xùn)才能上崗，所以目前的使用僅限于國(guó)家響應(yīng)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)的成員實(shí)驗(yàn)室 （LRN）或CDC特許實(shí)驗(yàn)室。

目前美國(guó)市場(chǎng)上用于猴痘檢測(cè)是試劑雖然有4個(gè)510（K）號(hào)碼和一個(gè)De Novo號(hào)碼，但實(shí)際上都是疾控中心（CDC）開發(fā)的同一款產(chǎn)品。這款產(chǎn)品其實(shí)有他的缺陷。由于它不能區(qū)別猴痘， 牛痘， 或其他正痘家族的病毒，也不能用于檢測(cè)天花病毒， 所以不能用于確診猴痘，而只能作為主要診斷手段之一。

目前美國(guó)市場(chǎng)上還沒有FDA批準(zhǔn)的商業(yè)檢測(cè)試劑，主要原因是以前美國(guó)市場(chǎng)上的需求不高，開發(fā)技術(shù)難度較大（比如CDC的方法一直無(wú)法區(qū)分猴痘和牛痘），以及FDA缺乏政策支持的力度（相對(duì)于新冠檢測(cè)而言）。

現(xiàn)在美國(guó)宣布進(jìn)入公衛(wèi)緊急狀態(tài)，F(xiàn)DA可能會(huì)調(diào)整對(duì)于開發(fā)猴痘檢測(cè)試劑的政策支持力度，讓我們拭目以待。

是否在美國(guó)申報(bào)猴痘試劑是一個(gè)商業(yè)決定， 取決于對(duì)猴痘流行模型的預(yù)測(cè)。目前CDC開發(fā)的試劑已經(jīng)可以滿足當(dāng)下美國(guó)的檢測(cè)需求，據(jù)曼度醫(yī)械咨詢估算，目前每天的實(shí)際檢測(cè)量小于最大檢測(cè)能力的50%。當(dāng)然這個(gè)情況也可能會(huì)隨著猴痘的進(jìn)一步流行而改變。

對(duì)于有興趣開發(fā)猴痘試劑的公司，猴痘的質(zhì)控樣可以在美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室（NIST）或一家名叫Twist Biosciences的公司購(gòu)買。

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